Д.Б. Васильев , В.С. Швед 
Московский Зоопарк, Клиника "Белый клык"   

     Сообщения об обнаружении вирусов в тканях больных и клинически здоровых рептилий начали появляться с конца 60-х г.г. ХХ века. За прошедшие 40 лет вирусы были найдены у представителей всех отрядов рептилий, включая гаттерий, от которых выделили ретровирусы. К настоящему моменту от рептилий выделены представители не менее 7 семейств РНК-содержащих и не менее 6 семейств ДНК-содержащих вирусов. Возбудители, по крайней мере, 12 вирусных болезней человека и животных, были инокулированы рептилиям экспериментально. При этом отмечали спектр реакций, начиная от низкотитровых и заканчивая нормальной репликацией вируса в тканях инфицированных животных. Тем не менее, полноценных нозологических единиц, то есть четко охарактеризованных болезней вирусной этиологии, для которых уже были выполнены постулаты Коха, не так уж много. Далеко не все из них имеют серьезное значение в ветеринарии рептилий. Однако, открытие в последние годы нескольких новых эмерджентных инфекций, несущих серьезную потенциальную угрозу не только искусственно созданным, но и природным популяциям рептилий и амфибий, заставляет гораздо внимательнее отнестись к вирусам, как к  вероятным этиологическим агентам при инфекционных заболеваниях этих животных. К таким «новым» инфекциям можно отнести ранавироз и хитридиомикоз амфибий, распространение вируса Западного Нила в популяции мисиссипских аллигаторов в США и некоторых других видов крокодилов в иных регионах Земного шара, заболевание ящериц, содержащихся в неволе, типичным иридовирусом насекомых, спонтанное заражение сухопутных и водных черепах ранавирусом лягушек, распространение герпесвируса черепах за пределы естественного энзоотического ареала, обнаружение серопозитивных к герпесвирусу и микоплазме черепах в естественных популяциях, а в последнее время и манифестных больных, обнаружение летального внутриядерного кокцидиоза у черепах в неволе и хламидийных инфекций у европейских видов гадюк и др. Эти вопросы приобретают все большее значение не только при содержании рептилий в зоопарках или при использовании их как объектов зоокультуры, но особенно при реализации программ по сохранению и реинтродукции редких видов, а также при регуляции торговли, транспортировки и установления ветеринарных норм для этой категории животных. В этом смысле ветеринарное законодательство пока остается несовершенным.

Так, в нашей стране при ввозе рептилий, проходящих по категории «прочие животные», предусмотрена только копроскопия и бактериологическое исследование на наличие сальмонелл. При этом такие серьезные заболевания, как криптоспоридиоз, гексамитиаз, амебиаз, диссеминированные микозы и подавляющее большинство вирусных инфекций остаются за рамками стандартного диагностического протокола. Предусмотренный для этих животных 30-дневный карантин, как правило, не достаточен для выявления таких болезней, как болезнь телец включения (IBD), парамиксовироз змей (OPMV), герпесвироз черепах (THV), криптоспоридиоз и некоторых других. Без использования иммунологических и молекулярных методов диагностики выявление персистентных инфекций у рептилий становится вообще очень затруднительным. Значительный прогресс в разработке таких методов был достигнут за рубежом за последние 5 лет. Это позволило выявить ряд новых вирусных нозологий и в некоторых случаях провести анализ эпизоотической ситуации и эволюции вирусных патогенов. Тем не менее, в настоящий момент новые диагностикумы не имеют широкого практического применения и остаются в арсенале лишь нескольких исследовательских лабораторий США и Европы. Вероятно в ближайшем будущем количество ветеринарных лабораторий, имеющих возможность проводить вирусологическую диагностику болезней рептилий, существенно возрастет. В этом случае в ряде стран такие исследования будут введены в стандартный протокол при получении ветеринарных сертификатов. Тогда список инфекций рептилий, требующих обязательного контроля при перемещении этих животных, заметно расширится, а для стран, не имеющих соответствующих возможностей, ужесточившиеся нормы транспортировки окажутся неприемлемыми. Все это может нанести существенный удар по существующему зооторговому рынку, в том числе, и по вполне легальному. В связи с этим основной задачей данного сообщения будет освещение современного состояния вопроса, характеристика возбудителей наиболее проблемных вирусных болезней рептилий, обсуждение принятых на сегодняшний день методов диагностики и терапии.

Болезни, вызываемые РНК-содержащими вирусами

РЕТРОВИРУСЫ

      Семейство Retroviridae – большая группа вирусов, поражающих все классы позвоночных и некоторых беспозвоночных (дрозофил, ленточных гельминтов). Вирионы ретровирусов представляют собой частицы сферической формы диаметром 80-100 нм. Они состоят из сердцевины, внутренней белковой мембраны и наружной липосодержащей оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной до 8 нм. В сердцевине различают икосаэдрическую капсулу и нуклеоид. У ретровирусов типа С нуклеоид находится в центре вириона. Геном ретровирусов, в отличие от такового всех других известных вирусов, является диплоидным и представлен двумя идентичными молекулами плюс-РНК, кодирующими у большинства вирусов 4 основных гена. Характерная особенность этих вирусов – наличие в составе вирионов РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы).

По современным представлениям, в семействе Retroviridae выделяют 7 родов, при этом ретровирусы типа С рептилий пока не имеют собственного родового ранга, хотя и отличаются от вирусов С-типа млекопитающих и птиц. За исключением IBD, почти все ретровирусные изоляты у рептилий были выделены из опухолей (Jacobson, 1986). Ретровирусные частицы С-типа были обнаружены в эмбриональной рабдомиосаркоме у маисового полоза Elaphe guttata, (Clark, Andersen, 1979), в культивированных клетках селезенки гадюки Рассела с миксофибромой (Zeigel and Clark, 1969), у обыкновенного удава с эритролейкозом (Konstantinov, Ippen, 1982) и нескольких пятнистых жарарак Bothrops moojeni с опухолями почек (Hoge et al., 1995). Несколько не связанных с опухолями ретровирусов было обнаружено в клеточных линиях сердца гадюки Рассела (Clark et al., 1973), в ядовитой железе жараракуссу и в тканях гаттерии Sphenodon punctatus (Carneiro et al., 1992), Ретровирусы, включая эндогенные провирусы, постоянно обнаруживают у разных видов рептилий с помощью молекулярных методов (Marschang et al., 2006). Неклассифицированные провирусы, напоминающие ретровирусы млекопитающих С-типа, были выделены от тигрового и пестрого питонов (Huder et al., 2002).

IBD (Inclusion Body Disease), болезнь телец включения
  Характеристика возбудителя
     IBD известна уже почти 30 лет; это заболевание поражает удавов и питонов в коллекциях змей по всему миру. Заболевание характеризуется образованием крупных эозинофильных включений в цитоплазме различных клеток эпителиального типа и нейронах ЦНС (Axthelm, 1985, 1989; Schumacher et al., 1994). При электронной микроскопии пораженных тканей выявляются вирусные частицы с морфологическими характеристиками, схожими с вирионами ретровируса рептилий С-типа. Вирус обладает обратной транскриптазной активностью. Вирус был впервые выделен группой Шумахера в 1994 г. (Schumacher et al., 1994), и этим коллективом были выполнены постулаты Коха. Однако впоследствии оригинальный изолят был утерян. Повторно вирус был изолирован группой Якобсона (Jacobson et al., 1996), но постулаты Коха удалось выполнить лишь частично. И в этом случае, и при инокуляции здоровым змеям других штаммов ретровирусов, выделенных впоследствии, не возникает характерных изменений в клетках, хотя наличие вирусного антигена определяется с помощью ПЦР. При этом введение суспензии зараженных тканей вызывает IBD у здоровых змей (Jacobson et al., 2004). Интересно, что исследование ультраструктуры включений показывает, что они состоят только из белковых метаболитов, поскольку клетки не имеют дегенеративных изменений, не индуцируют воспалительную реакцию и не содержат инфекционного агента. В дальнейшем было выяснено, что тельца включений в основном состоят из антигенно-уникального белка массой 68 кД (Wozniak et al., 2000). В настоящий момент предполагается, что IBD – инфекционное заболевание, вызывающее системное нарушение клеточного метаболизма, по-видимому, индуцированное ретровирусом и имеющее характерные клинические манифестации.
По данным разных авторов IBD встречается в основном у императорского удава B. constrictor imperator, других подвидов B. constrictor, кольчатого удава C. annulatus, а также у некоторых питонов, в основном, у тигровых. Этому противоречат данные Garner & Raymond (2004), которые не обнаружили заболевания ни у павших питонов (N=301), ни у анаконд (N=20). В некоторых случаях при характерной клинике IBD и обнаружении ретровируса, в тканях не происходит образования характерных телец включения (Boyer, Frye, 2000), в других случаях гистологически поставленный диагноз не был подтвержден результатами ТЭМ. Такие сомнительные случаи IBD описаны у ужеобразных змей L. pyromelana (Jacobson, 1989) и маисовых полозов E. guttata (Fleming et al., 2003), а также у нескольких видов питонов рода Morelia и пальмовых ботропсов B. marchi (Raymond et al., 2001). В настоящее время не ясно, являются ли эти заболевания результатом заражения одним или несколькими видами ретровирусов или представляют собой болезни разной этиологии, имеющие сходное клиническое течение.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
У заболевших змей отмечают медленно прогрессирующую кахексию, нарушение линьки, координации движений, отрыгивание корма, неврологические расстройства («вертячку», анизохорию, задирание и подергивание головы, опистотонус, неправильное положение колец тела), реже отмечают новообразования (в основном на коже) и лейкозные реакции (до 80-100 тыс/мкл, преимущественно лимфоциты и пролимфоциты), а также вторичные инфекции. Изменения, выявляемые на вскрытии, обычно носят вторичный характер. Отмечают подагру почек, септический тромбоз, гепатоклеточный липидоз или гепатит, меланоз печени, дегенеративные изменения в поджелудочной железе и почках, интерстициальную пневмонию и т.п. Патогномоничным симптомом для удавов и питонов считают воспаление и формирование абсцессов в солитарных железах пищевода, развитых у ложноногих змей (Jacobson et al., 1999). Эозинофильные включения в цитоплазме можно наблюдать практически в любых клетках и тканях, однако их количество может сильно варьировать. В отдельных случаях при световой микроскопии включения вообще не выявляются. Чаще всего их можно обнаружить в экзокринной части поджелудочной железы (в 100% случаев), в эпителиальной выстилке пищевода и желудка (в 30% случаев). При лейкозных реакциях включения выявляются в цитоплазме приблизительно в 1% периферических лимфоцитов.

Антигенная вариабельность и родство
     Исследованные ретровирусы позвоночных имеют высокую видоспецифичность, и, поэтому, вполне вероятно, что различные штаммы ретровирусов, выделенные от змей, будут обладать генетическим и антигенным полиморфизмом. Пока, тем не менее, данные о секвенировании вирус-специфических нуклеиновых кислот и сравнительном анализе с известными генами других изолятов ретровирусов в литературе не представлены. Вирусные белки от 3-х изолятов ретровируса RV-1,2,3, выделенных от обыкновенного и мадагаскарского удавов (Jacobson et al., 1999) показали сходные характеристики при миграции в агарозном геле. Также был исследован специфический 68кД-белок, формирующий тельца включений; к нему были получены моноклональные антитела и проведен блотинг и попытки секвенирования. Однако сравнение этих данных с другими пробами белков пока не проводили (Jacobson et al., 2004).
Известно, что морфология телец включений при исследовании с помощью ТЭМ может отличаться. Так, включения, обнаруженные у полозов E. guttata, были связаны с мембранами ЭПР, содержали электронноплотный флуктуирующий материал, и размер включений составлял 2-4 мкм. Включения, описанные у обыкновенного удава B. constrictor, не были связаны с мембранами, содержали электронноплотные субъединицы, лежащие по периферии включения и были размером 1-4 мкм (Fleming et al., 2003). Другие тельца включений могут содержать мелкие филаменты, электронноплотные субъединицы или гексагональные капсиды. Непонятно, являются ли эти различия результатом полиморфизма вирусных штаммов, особенностей клеточного метаболизма у разных видов змей или речь вообще идет о разных заболеваниях вирусной или невирусной природы. 

Экспериментальная инфекция
     Постулаты Коха для IBD были выполнены группой Schumacher et al. (1994) и затем Jacobson et al. (1996). При инокуляции экспериментальным животным суспензии зараженных тканей формирование включений в гепатоцитах наблюдалось через 15-24 недели.
Эпизоотологические особенности
В конце 70-х, начале 80-х годов в США IBD регистрировали преимущественно у молодых, разведенных в неволе тигровых питонов. У этих змей болезнь протекает более остро и неврологические нарушения наблюдают чаще, чем у других видов (Jacobson et al., 2001). Это может указывать на отсутствие у данного вида иммунокомпетентности к IBD или о низком уровне сероконверсии. В последние 10 лет болезнь чаще всего встречают у обыкновенных и императорских удавов (Lock et al., 2003). Недавно проведенное исследование на наличие вирусного антигена с помощью nested PCR у диких удавов в Коста-Рике и содержавшихся в коллекциях Германии (N=22), выявило позитивную реакцию практически во всех образцах крови, взятой от удавов, и ее отсутствие в образцах от других видов змей (Marschang et al., 2006). Это заставляет предположить, что болезнь имеет натуральный природный резервуар в популяции обыкновенных удавов в Южной Америке. Источником являются в основном персистентные носители и клинически больные животные. Распространение происходит, вероятно, с помощью пассивной трансмиссии змеиным клещом O. natricis, контактно, с кормом и водой, а также, возможно, путем вертикальной передачи от родителей эндогенных форм вируса.
 
Вирусоносительство и выделение вируса
       Несомненно, что выделение вируса может начинаться задолго до появления клинических симптомов у змей, являющихся источником инфекции. Медленное прогрессирование заболевания, стертость и невыразительность клинических симптомов делают возможным заражение и от манифестных больных. Без внедрения в практику серологических и других методов прижизненной диагностики заболевания достоверно оценить эпизоотическую ситуацию по IBD пока невозможно.
Диагностика
Диагноз ставят на основании клинических симптомов и обнаружении телец включения в тканях больных животных. Для прижизненной диагностики рекомендуют слепую пункционную биопсию печени или эксцизионную биопсию слизистой из области пищеводных желез и кардии желудка, выполненную с помощью фиброэндоскопа. Можно брать биопсию кожи (на всю толщу кожного лоскута) из нескольких участков. Включения можно изредка обнаружить в миелоцитах и лимфоцитах костного мозга или мазках периферической крови. Однако, в цитологических образцах включения плохо прокрашиваются модификациями Романовского, а клеточный материал быстро разрушается вследствие осмотического шока. Образцы тканей, в которых включения были выявлены с помощью световой микроскопии, следует также исследовать с помощью ТЭМ для уточнения природы включений. Кроме того, желательно исследовать гистологический материал с помощью специальных окрасок на наличие нуклеиновых кислот. Рекомендуется также проводить электрофорез для выявления специфического 68-кД белка, но для этого пригоден только свежий или замороженный материал, не обработанный фиксаторами. 
В последние годы были получены антивидовые сыворотки к IgG Boa constrictor, на основании которых была разработана и тестирована непрямая ELISA (Lock et al., 2003) для обнаружения антител к ретровирусу. В качестве вирус-специфического антигена использовали очищенный штамм, выделенный от Boa constrictor с IBD в культуре клеток VH-1 в 2001 г. (Jacobson et al., 2001). Кроме того, были получены моноклональные антитела к 68кД-белку (Jacobson et al., 2004). Однако, ELISA пока не введена в практику. В Германии используют недавно разработанную nested-PCR на праймерах к вирус-специфической протеазе и обратной транскриптазе (Marschang et al., 2006).
Эндогенные провирусы у рептилий обнаруживают с помощью ПЦР на субстрате культуры лейкоцитов (Huder et al., 2002). Тем не менее, посмертное гистологическое исследование пока остается единственным практическим методом диагностики IBD, принятым во всех странах.

Дифференциальная диагностика
      Клинически IBD необходимо дифференцировать с любыми инфекционными и неинфекционными заболеваниями, вызывающими неврологические нарушения, такими как менингоэнцефалит, полигиповитаминозы В, подагра, интоксикации, инсульт и т.п. При обнаружении включений в цитоплазме или ядрах клеток эпителиального типа или нейронах необходимо определить природу этих включений. Обнаружение эозинофильных цитоплазматических включений с помощью световой микроскопии не уточняет диагноз IBD. Специальные гистохимические окраски могут помочь в определении нуклеинового материала телец включений, который может свидетельствовать о присутствии вирионов. Окраска метиловым зелёным пиронином используется для выявления РНК. Реакция Фёльгена используется для окраски ДНК, где акридиновый оранжевый окрашивает РНК в красно-желтый, а ДНК в желто-зеленый цвет.

У млекопитающих практически нет заболеваний не вирусной природы, при которых образуются внутриклеточные включения (Cheville, 1983). Исключением можно считать образование телец Маллори, которые состоят из гиалина. Отравление свинцом может быть причиной внутриядерных включений, представляющих собой свинцово-гистонные комплексы (Cheville, 1983; Coffin, 1996). При вирусном заболевании рептилий могут возникать включения, содержащие вирусные компоненты, такие как капсид, нуклеиновый материал, однако включения без вирусного компонента тоже могут присутствовать при вирусных инфекциях, и не только в случае IBD. Это было продемонстрировано при парамиксовирусной инфекции, когда в цитоплазме эпителия протоков поджелудочной железы гремучников образовывались характерные эозинофильные включения, которые состояли исключительно из гомогенного белкового материала (Jacobson, 1989). Таким образом, если присутствуют включения, должны быть взяты пробы для исследования с помощью специальных окрасок на нуклеиновый материал, электрофорез для определения вирусного белка и сопоставление ультрамикроснимков, полученных с помощью ТЭМ, со структурной морфологией включений.

Терапия не разработана. Змеи с подтвержденным диагнозом IBD должны подвергаться эвтаназии. Единственное сообщение о попытке применения ингибиторов обратной транскриптазы для рептилий сделал Levine (2002). Автор использовал для терапии обыкновенного удава с лейкемической формой IBD препарат Trizivir (Glaxo, SmithKline), представляющий собой комбинацию трех ингибиторов ревертазы (abacivir, zidovudine и lamivuridine). Доза была рассчитана аллометрически от млекопитающих и составила по компоненту абацивира 5 мг на змею массой 32 кг каждые 72 часа. На фоне терапии нормализовалась картина крови, и змея начала брать корм. К сожалению, удав вскоре пал, и так как вскрытие не проводили, автор не смог сделать окончательного заключения об эффективности этой терапии.

РЕОВИРУСЫ

     Большая группа вирусов, поражающих позвоночных, насекомых и растения. Вирионы представляют собой неконвертирующиеся икосаэдрические частицы размером 60-80 нм, состоят из двойного капсида и сердцевины, содержащей 2-спиральную линейную РНК. 
Семейство Reoviridae включает 9 родов.


Характеристика возбудителя
     Впервые о вирусном эцефалите удавов, возможно, ошибочно, сообщил Axthelm (1989). Наиболее специфическое заболевание, связанное с поражением нижних отделов респираторного тракта, описано у полозов E. mollendorfi и E. taeniura (Lamirande et al., 1999). При эпизоотической вспышке в группе аризонских королевских змей, L. pyromelana, отмечали поражение тонкого кишечника и печени (Reavill et al., 2003). Вирус также был выделен от взрослой самки удава, B. constrictor, с характерной клиникой IBD (Schragen, Hetzel et al., 2004). Эпизоотическую вспышку респираторного заболевания регистрировали в группе мохавских гремучих змей, C. scutulatus (Wellehan et al., 2005). Кроме того, ретровирусы изолировали от клинически здоровых рептилий, собакоголовых удавов C. caninus; королевских питонов P. regius; полозов E. longissima, зеленого гремучника C. viridis, игуан I. iguana и Ctenozaura sp., зеленой ящерицы L. viridis.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
     У рептилий реовирусы вызывают острую летальную пневмонию, подострый трахеит, симптомы поражения ЦНС, поражение ЖКТ и печени, в редких случаях изолируются наряду с ретровирусами при IBD у удавов. Прижизненно может отмечаться снижение массы тела, отрыгивание корма, респираторный синдром.
На секции выявляли острую интерстициальную бронхопневмонию, некротизирующий колит или гепатит с образованием многоядерных формаций, серозную атрофию жира. Тельца включений обычно выявляются только с помощью ТЭМ в цитоплазме энтероцитов, гепатоцитов и альвеоцитов.

Антигенная вариабельность и родство
    Во всех случаях, когда проводилось секвенирование вирусной РНК, вирус был отнесен к роду Orthoreovirus. Вирус охарактеризован как новый, отличающийся генетически от ортореовирусов птиц и млекопитающих.

Экспериментальная инфекция
     Заражение тонкохвостых полозов E. taeniura изолятом, выделенным от спонтанно инфицированных полозов Меллендорфа E. mollendorfi и частичное выполнение постулатов Коха провели Lamirande et al. (1999). Группа Райчел Маршанг (Schragen et al., 2004) инокулировала суспензию культуры вируса, выделенного от самки обыкновенного удава B. constrictor с  клиникой IBD, 10 новорожденным удавам. Вирусную РНК обнаружили у всех инфицированных змей через 18 недель с помощью ПЦР и выдели вирус в культуре у части животных после эвтаназии.

Диагностика
     Выделение вируса в культуре клеток сердца гадюки (VH-2), обнаружение вирусных частиц в тканях рептилий с помощью ТЭМ, ПЦР-диагностика (nested PCR) на праймерах к вирусной РНК-зависимой полимеразы ортореовируса млекопитающих и аквареовируса рыб (Wellehan et al., 2005). Единственный разработанный серологический тест – РН (Marschang et al., 2002). 

Дифференциальная диагностика
     При поражении легких дифференцируют с парамиксовирозом.
При поражении ЖКТ – с аденовирозом.
При поражении ЦНС – с ретровирозом (IBD).

Терапия
     При эпизоотических вспышках в группах королевских змей и мохавских гремучников часть животных удалось сохранить, проведя поддерживающую терапию и профилактику вторичной инфекции цефтазидимом.

ПАРАМИКСОВИРУСЫ

     Представители подсемейства Paramyxovirinae поражают разные виды позвоночных. Вирионы – плеоморфные частицы диаметром 150-300 нм, имеют нуклеокапсид спиральной симметрии и липопротеиновую оболочку, на поверхности которой имеются выступы длиной 8-12 нм. Геном представлен односпиральной линейной молекулой минус-РНК. Подсемейство включает 3 рода.

Характеристика возбудителя
Впервые вирус был выделен во время эпизоотической вспышки в группе ямкоголовых гадюк Bothrops atrox, начавшейся в серпентарии (Швейцария) в 1973 г. У змей внезапно развилась атония мышц и ступорозное состояние, после чего через несколько дней проявились симптомы острого респираторного заболевания (уже в терминальной стадии). На вскрытии у павших животных обнаружили большое количество кровянистого экссудата в легких и полости тела (Folsch, Leloup, 1976). Вначале болезнь посчитали обусловленной синегнойной палочкой, P. aerugenosa. Затем гомогенат легочной ткани ввели в полость аллантоиса яиц ложной водяной кобры C. gigas, что вызвало их гибель в течение 7 дней. Суспензия из яиц вызвала ЦПД в культуре клеток фибромы гремучей змеи при температуре 300С. Выделенный вирус, исследованный с помощью НЭМ, был определен как парамиксовирус (Clark et al., 1979) и получил название FDLV (Fer-de-lance virus). После этого в 1980 г. болезнь была описана Элиотом Якобсоном в США, и затем эпизоотические вспышки наблюдали во многих зоопарках США и Европы, включая Московский зоопарк (Кудрявцев, Тимерина, 2000). Вирус получил номенклатурное название OPMV (Ophidian paramyxovirus). В последние годы вирус был выделен у нескольких видов ящериц, как клинически здоровых (игуан, ксенозавров, аллигаторовых ящериц, смарагдового варана, тегу), так и имевших заболевание легких (Boyer et al., 2005). Несколько эпизоотических вспышек за 2-летний период зарегистрировали в группе каймановых ящериц Dracaena guianensis (Jacobson, Origgi et al., 2000).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
К вирусу чувствительны настоящие и ямкоголовые гадюки, ложноногие змеи и, возможно, некоторые виды ужеобразных змей. На пике эпизоотической вспышки заболевание протекает остро (2-3 недели) или даже молниеносно (сутки), к концу эпизоотического процесса и у менее чувствительных видов принимая скорее подострое или хроническое течение (1-6 месяцев). При острой инфекции, особенно у гремучих змей, наблюдают экссудативную пневмонию, часто с геморрагическим экссудатом или открытым кровотечением из трахеи. Могут отмечаться острые неврологические расстройства: волнообразные движения, односторонние спастические явления, потеря установочного рефлекса. На вскрытии отмечают сильный интерстициальный отек и обильный экссудат в легком и полости тела. Гистологически отмечают пролиферацию выстилающих альвеолярных клеток II типа в легких, инфильтрацию гетерофилами, утолщение альвеолярных стенок. Воспалительные инфильтраты и кровоизлияния могут заполнять воздухоносные пространства. Кроме того, наблюдается интерстициальный отек и обширные очаги фиброза в поджелудочной железе. Наиболее характерные изменения – некроз эпителия протоков с преобладанием реактивной гиперплазии и синцитиальных клеток. При подостром и хроническом течении, характерном для старых гремучих змей, наблюдают ступорозное состояние, кахексию, периферические параличи, слизь в ротовой полости. Перед появлением клинических симптомов змеи могут пропускать 1-2 кормления. Смерть обычно наступает от сопутствующей бактериальной или грибковой пневмонии. У павших животных типичные макроскопические изменения, за исключением «пролиферативной» пневмонии, могут отсутствовать. Характерны очаги интерстициального фиброза, сконцентрированные вокруг протоков поджелудочной железы. Похожие изменения могут встречаться в желчных протоках, слюнных и ядовитых железах. В гистологических препаратах иногда можно наблюдать амфофильные внутриядерные и внутрицитоплазматические включения. В цитологическом материале, полученном из легких, специфические включения обычно не выявляются.

Антигенная вариабельность и родство
     Для разработки генетических и серологических тестов было выделено 3 штамма OPMV: Fer-de-lance virus, Bush-viper virus и Neotropical virus. Результаты использования этих штаммов в нескольких лабораториях США показали, что между ними существует достоверный антигенный полиморфизм. Секвенирование 16 штаммов OPMV и сравнение по L и HN вирус-специфическим генам показало, что HN-ген имеет почти одинаковую длину во всех образцах, тогда как L-ген в некоторых случаях вообще не обнаруживается (Kik et al., 2004). При парамиксовирусной инфекции ящериц позитивные серологические реакции на антиген OPMV выявляются только в редких случаях. При парамиксовирозе, подтвержденном с помощью НЭМ, у водяной агамы не смогли выявить ни вирусной ДНК, ни матричной РНК, проводя ПЦР на праймерах для выявления OPMV (Boyer et al., 2005). Вероятно, генетический и антигенный полиморфизм характерен и для вирусов, поражающих различные семейства змей.

Экспериментальная инфекция
     Постулаты Коха при OPMV были выполнены Элиотом Якобсоном с соавторами (Jacobson, Adams et al., 2000) на экспериментальной группе гремучников острова Аруба Crotalus unicolor. Через 4 дня после интратрахеальной инокуляции штамма OPMV (“Aruba rattlesnake virus”) отметили инфильтрацию гетерофилами интерстиция легких. Через 9 дней начались процессы гиперплазии эпителия, в инфильтрате появились лимфоциты и макрофаги в краниальном отделе легкого. Через 15 дней выраженные изменения захватывали все отделы легкого, а к 19-22 дню последовала гибель всех зараженных змей. К этому моменту в краниальном отделе легкого  был выражен коагуляционный некроз, вакуализация альвеолярного эпителия в среднем отделе, наблюдались многочисленные эозинофильные тельца включений в цитоплазме альвеоцитов. С 4-го дня после заражения вирусный антиген выявили в легком с помощью окраски ИФА. ТЭМ выявила гиперплазию альвеоцитов II типа и деструкцию клеток I типа. Выделение вируса в просвет альвеол наблюдали с 9 по 19 день после заражения. Ни у одного из животных за этот срок не выявили сероконверсию с помощью РТГА. Антитела в определяемом титре появляются у переболевших животных через 6-9 недель после инокуляции вируса. Постулаты Коха также были частично выполнены во время эпизоотической вспышки в группе каймановых ящериц (Jacobson, Origgi et al., 2000). Вирус выделили в культуре клеток VH-1, и затем супернатантом инокулировали клетки Vero, где вирус был выделен повторно.

Диагностика
     Диагностируют все подозрительные случаи, касающиеся острых пневмоний пролиферативного характера или неврологических нарушений у чувствительных видов змей. Ставят диагноз на основании макроскопических изменений, гистологического исследования и НЭМ легочного экссудата. Вирус изолируют в культуре клеток VH-1, Vero или на куриных эмбрионах. Для уточнения диагноза применяют РИФ, для чего образцы тканей необходимо замораживать при -20 – 700С. Для выявления серопозитивных животных применяют РТГА, разработанную Элиотом Якобсоном (Jacobson et al., 1981), который использовал первый изолированный штамм “Fer-de-lance virus”. В дальнейшем была разработана РТГА на основе штамма “Neotropical”. В настоящее время в США РТГА проводят только 3 лаборатории, каждая на основе собственного штамма. При этом перекрестные реакции к различным штаммам вируса могут заметно отличаться. Позитивным считается титр от 1:20. Змеи, перенесшие OPMV, могут иметь чрезвычайно высокие титры, более 10240. Для определения активной инфекции повторную пробу берут через 2-4 недели. Повышение титра более чем на одно разведение указывает на активную инфекцию. Плазму для анализа берут с литиевым гепарином и транспортируют на сухом льду; требуется 0,2 мл плазмы.
В Европе в последние годы стали применять ПЦР, разработанную Ahne et al. (1999). Праймеры для ПЦР были получены секвенированием L-гена из всех 3-х штаммов вируса.

Дифференциальная диагностика
     У удавов и питонов OPMV необходимо дифференцировать с IBD, особенно при наличии неврологических симптомов. У гадюк и ямкоголовых гадюк дифференциальный диагноз включает острые и хронические пневмонии иной этиологии, а также септицемию с геморрагическим синдромом.

Терапия
     Необходим карантин для вновь поступающих змей не менее 90 дней и серологический контроль при поступлении и через 2-3 месяца. Серопозитивных змей и животных, имеющих подозрительную симптоматику, необходимо строго изолировать. Неспецифическая терапия включает профилактику вторичной инфекции с помощью антибиотиков, назначение витаминов и иммуномодуляторов. Во время эпизоотической вспышки OPMV, начавшейся в июле 1999 г. в Московском зоопарке, животным назначали деринат, гаммаплант и для купания змей использовали сильный вирулицидный дезинфектант – септабик в 0,025% концентрации (Кудрявцев, Тимерина, 2000).
Иммунитет и специфическая профилактика
Исследования по созданию убитой вакцины для профилактики OPMV проводились в начале 90-х годов в США (Jacobson et al., 1992), но затем были прекращены в связи с недостаточным финансированием.

ФЛАВИВИРУСЫ

     Вирусы семейства Flaviviridae поражают позвоночных и насекомых. Вирионы представляют собой сферические частицы диаметром 40-60 нм. Они состоят из нуклеокапсида икосаэдрической симметрии и наружной липопротеидной оболочки. Геном представлен односпиральной молекулой РНК. В семействе выделяют 3 рода. Представители центрального рода Flavivirus вызывают около 30 заболеваний человека и около 8-10 видов заболеваний домашних животных.  

Характеристика возбудителя
     Вирус Западного Нила – арбовирусная болезнь, эндемичная для Африки, Азии, Европы и Океании, которая передается комарами семейства Culicidae. Вирус поражает человека, млекопитающих и птиц, вызывая у чувствительных видов явления менингоэнцефалита. Сравнительно недавно вирус проник в США. Первая эпизоотия среди птиц была зарегистрирована в Нью-Йорке в 1999 г. В основном заболевали вороны и дневные хищники. К 2002 г. вирус распространился практически по всем штатам, причем только за лето того года заболело 120 человек, 11 из которых умерло. В 2001 г. были описаны первые случаи заболевания аллигаторов во Флориде на крокодильих фермах, а в следующем году – на фермах во Флориде, Джорджии, а также на ферме нильских крокодилов в Израиле и среди крокодилов Морелетта C. moreletti в Мексике (Jacobson, 2004). К 2005 г. болезнь зарегистрировали в Техасе, Луизиане и Айдахо, причем только в Луизиане погибло 5000 молодых аллигаторов, и было зафиксировано 4 случая заражения людей из персонала ферм (Nevarez et al., 2005). Среди диких аллигаторов в эпизоотических очагах были обнаружены серопозитивные особи.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
У аллигаторов в возрасте 1-2 месяцев болезнь проявляется неврологической симптоматикой (плавание по кругу, атаксия, тремор мышц и головы), отмечается вздутие желудка и скопление в нем воды, вероятно, в связи с парезами мышц, участвующих в глотании. Симптомы развиваются через 7-10 дней после контакта с больными животными. При остром течении (6-8 дней) летальность составляет 40-60%. У аллигаторов в возрасте 12-14 месяцев отмечали летаргию, спастический тортиколлис и вздутие кишечника с нарушением флотации. На вскрытии обычно отмечают макроскопические изменения в печени, легких, миокарде, головном мозге, в толстом кишечнике – выраженный фибринозный колит с образованием характерных псевдомембран. Гистологически выявляется гетерофильный менингоэнцефалит; некротический гетерофильный гепатит; гетерофильный гистиоцитарный спленит, генерализованный лимфофолликулит и некротический гетерофильный панкреатит. С помощью иммуноперидоксидазной окраски выявляется высокая иммунопозитивность тканей мозга, селезенки, поджелудочной железы, почек и ЖКТ.

Антигенная вариабельность и родство
     Для крокодиловых ВЗН является типичной эмерджентной инфекцией и, по-видимому, связан с интродукцией одного штамма вируса, патогенного для человека, птиц и лошадей. Тем не менее, при выделении вируса, полученного от аллигаторов, в культуре клеток Vero, в отдельных случаях наблюдали удивительно раннее ЦПД (Nevarez et al., 2005). Пока не выяснено, могут ли штаммы вируса, изолированные от аллигаторов, реплицироваться быстрее, чем штаммы от других животных, или это доза-зависимый эффект, связанный с чрезвычайно высоким количеством вируса в зараженных тканях.

Вирусоносительство и выделение вируса 
     В настоящий момент роль рептилий в эпизоотологии ВЗН остается неизученной. Среди диких черепах с помощью РТГА не смогли выявить серопозитивных особей (Mitchell el al., 2002). Сероконверсию отмечали у диких аллигаторов после вспышки заболевания среди птиц, однако титры антител оказались значительно ниже, чем у остро переболевших животных на фермах (Jacobson, 2004). У последних высокие титры сохраняются более 1 года после вспышки заболевания. По некоторым данным у заболевших аллигаторов отмечается высокая виремия и, по-видимому, значительное выделение вируса (Miller et al., 2003). Исходя из данных о характере эпизоотических вспышек, предполагается, что ВЗН может распространяться среди чувствительных видов крокодилов более агрессивными путями, чем только трансмиссивно. Недавно было сообщено о парентеральной и оральной инокуляции вируса в экспериментальной группе аллигаторов (Klenk et al., 2004). Это создает потенциальную опасность заражения людей, находящихся в прямом контакте с фекалиями и тканями животных.

Диагностика
     Для серологической диагностики ВЗН у рептилий не применяют PRNT (реакцию нейтрализации редукции бляшек), принятую в диагностике арбовирусных болезней млекопитающих. Для прижизненного выявления сероконверсии используют недавно разработанную непрямую ELISA, основанную на полученных антивидовых поликлональных антителах кролика к IgG аллигатора (Jacobson, 2004). Для посмертной диагностики применяют специфический иммуноперидоксидазный тест, непрямую иммунофлуоресцентную окраску с использованием доступных коммерческих антиарбовирусных моноклональных антител к ВЗН млекопитающих, а также выделение вируса в культуре и ПЦР. Для изоляции вируса используют культивирование и субкультивирование на клеточных линиях Vero. ЦПД обычно наблюдают в течение 3-10 дней. RT-PCR была разработана Lanciotti et al. (2000). Для реакции использовали праймер к оболочечному гену, позволяющий выявлять вирусную РНК в материале от человека, птиц и насекомых-переносчиков.

Дифференциальная диагностика 
     Заболевание дифференцируют с любыми состояниями, характеризующимися неврологической симптоматикой.

Терапия 
     Не разработана. Профилактические меры включают строгую изоляцию всей группы животных, в которой зафиксировано заболевание, и борьбу с переносчиками вируса. 


Болезни, вызываемые ДНК-содержащими вирусами

ГЕРПЕСВИРУСЫ

     Вирусы семейства Herpesviridae – самые распространенные вирусные патогены среди людей и животных. Вирионы герпесвирусов состоят из капсида икосаэдрической формы диаметром 120-150 нм, окруженного внутренним тегументом и наружной оболочкой, имеющей многочисленные шипы до 8 нм в длину. Капсид окружает ядро вириона, состоящее из линейной 2-нитчатой ДНК с молекулярной массой 92-102 кД и окруженной белком. Вирионы имеют сложную организацию, включающую нуклеотид, суперкапсидную структуру и оболочку. В составе вириона определено до 32 белков.
Герпесвирусные частицы неоднократно наблюдали в тканях как здоровых, так и больных рептилий. Некоторые из большого количества изолированных штаммов вируса способны вызывать вполне самостоятельные заболевания:
•   GPD – серопятнистая болезнь панциря морских черепах (Rebell et al., 1975; Heines, Kleese, 1977);
•   Фибропапилломатоз морских черепах (Jacobson et al., 1991);
•   LETD (Lung, eye, trachea disease) зеленых морских черепах (Curry et al., 2000);
•   (THV) Герпесвироз (комплекс «стоматит/ринит/конъюктивит») сухопутных черепах (Harper et al., 1982; и многие другие);
•   (LPD) Лимфопролиферативная болезнь сухопутных черепах (Mc Arthur, 1998, 2000);
•   HHWE (Hemolytic-hemorrhagic-wasting episode) пантеровых черепах (Mc Arthur, 2000);
•   Вирусный папилломатоз лацертид (Raynaud, Adrian, 1976);
•   Стоматит ящериц (Wellehan et al., 2003);
•   Некротический гепатит чаквалл (Wellehan et al., 2003);
•   Заболевание ядовитых желез змей (Jacobson, 2000);
•   Лимфофолликулярный клоацит мисиссипских аллигаторов (Johnson et al., 2005).

THV (герпесвироз сухопутных черепах)
    
Характеристика возбудителя
     Болезнь сухопутных черепах, связанная с поражением верхних отделов респираторного и пищеварительного тракта, известна с начала 80-х годов ХХ века (Harper et al., 1982). Впервые герпесвирус от заболевших в неволе черепах выделили Biermann, Blahak (1993). Затем антитела к вирусу герпеса у диких черепах впервые обнаружили две независимые рабочие группы: Marschang и Schneider (2002) от средиземноморской черепахи T. graeca в Турции и Origgi с соавторами (2002) от гоферовой черепахи G. agassizii в США. С конца 90-х годов вирусные эпизоотии отмечали среди многочисленных коллекций черепах Европы, США, ЮАР, Японии и Австралии. К настоящему времени вирус был выделен почти от 50 видов черепах. Наиболее чувствительны к вирусу герпеса черепахи рода Testudo, однако предполагается, что любые виды черепах, включая пресноводных, потенциально восприимчивы к этому заболеванию.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
     Патогномоничным симптомом считается наличие дифтеритических пленок на слизистой языка, ротовой полости, носоглотки, трахеи и пищевода. Кроме этого характерны ринит, конъюктивит, отек вентральной стороны шеи, птиализм (наиболее ранний симптом), пневмония и эмфизема легких, неврологические расстройства, лимфопролиферация, изредка диарея. Дифтеритические бляшки при экспериментальной инфекции сохраняются до 3-х недель, а затем спонтанно исчезают (Origgi et al., 2001). Инкубационный период варьирует от нескольких дней до года. В типичном случае клинические симптомы возникают в течение 3-4 недель после покупки животного или после зимовки. Переболевшие особи остаются латентными носителями на неопределенно долгий срок (до 25 лет). У видов, не вырабатывающих высоких титров антител, смертность составляет 80-100%. Среди средиземноморских черепах смертность достигает 60%; у взрослых черепах болезнь чаще всего принимает хроническое течение.
Вирус имеет повышенный тропизм к тканям ЦНС, однако макроскопически выявляется катаральный или дифтероидно-некротический стоматит, глоссит и фарингит. В меньшей степени подобные изменения выражены в пищеводе, трахее и легких. Реже встречается гиперплазия селезенки, гепатомегалия, катаральный энтерит. Характерна инфильтрация преимущественно мононуклеарами, гетерофилы появляются при вторичной бактериальной инфекции. Вирусные эозинофильные включения можно наблюдать в ядрах клеток головного мозга (особенно продолговатого) наряду с периваскулярными лейкоцитарными «манжетами». Чаще всего включения обнаруживают в эпителии языка, выстилке ротовой полости и трахеи, в ЖКТ (от пищевода до двенадцатиперстной кишки), легких, печени, реже в почках и мочевом пузыре, селезенке. Лучше всего они видны на стыках между некротизированными и нормальными клетками.

Антигенная вариабельность и родство
    В настоящее время выделено более 100 изолятов вируса. Между штаммами существуют достоверные различия по антигенным и генетическим свойствам. Marschang et al. (2004) выделяет два независимых серотипа вируса среди штаммов, выделенных у черепах рода Testudo и некоторых африканских видов. Blahak, Tornede (2004) говорят о существовании 3-х серотипов вируса, причем серотип III характерен в основном для среднеазиатских черепах A. horsfieldi. Идентичность по секвенированному гену вирус-специфической рибонуклеотид-редуктазы у штаммов вируса, выделенных от американских гоферовых черепах и балканской черепахи, составила только 72%.
Существуют несомненные различия по вирулентности, патогенности и напряженности вирус-индуцированного иммунитета между различными штаммами вируса. До сих пор остается неизученным антигенное и генетическое родство между вирусами, вызывающими THV и другие заболевания сухопутных и морских черепах герпесвирусной этиологии. Данные о секвенировании генов герпесвирусов, изолированных от рептилий, позволяют отнести их всех к подсемейству Alphaherpesvirinae. 
    
Вирусоносительство и выделение вируса
     При первичном контакте восприимчивых животных с вирусом развивается остро протекающее заболевание, имеющее тенденцию к подострому или хроническому течению у взрослых черепах. Заболевание протекает в течение 2-20 дней и заканчивается 60-100% гибелью животных в зависимости от их возраста и вида. Переболевшие черепахи вырабатывают антитела; максимальный титр отмечают приблизительно через 6 недель после начала заболевания, однако его величина различается у разных видов черепах. Из черепах рода Testudo наименьший титр характерен для T. hermanni, именно этот вид тяжелее всего переносит THV. 
При первичном заражении вероятно существование латентного периода, так как при экспериментальной инфекции через 40 дней после заражения в тканях обнаруживают только не реплицирующуюся вирусную ДНК. Переболевшие черепахи могут оставаться латентными вирусоносителями в течение всей жизни. При экспериментальной инфекции выделить вирус от переболевших животных пока не удалось. Однако при провоцирующих эпизодах (зимовка, стресс, транспортировка, гормональные факторы, сопутствующие заболевания) вирус может активизироваться и вызывать рецидивы, напоминающие первичное остро протекающее заболевание. Введение латентных носителей в группы неиммунных животных в любой момент способно вызвать у них манифестное заболевание.

Эпизоотологические особенности
     THV стал привлекать пристальное внимание после массовой гибели черепах в коллекциях Великобритании, Италии, Франции, Испании, Германии, Австрии и Швейцарии. Возможно, вирус был интродуцирован при импорте средиземноморских черепах T. graeca из Турции. «Лимфопролиферативная болезнь» герпесвирусной этиологии, по-видимому, была ввезена в Европу с пантеровыми черепахами G. pardalis из Западной Африки (Mc Arthur et al., 2001). Большинство европейских изолятов герпесвируса относятся к серотипу I. К этому же серотипу относят вирус, вызывающий THV у американских гоферовых черепах. По некоторым данным в коллекциях Германии около 15% черепах оказываются позитивными по антителам к вирусу герпеса (ELISA и PH). В природных популяциях Франции, Марокко, Турции и США также зафиксированы иммунокомпетентные к вирусу черепахи; порядка 11-37% из исследованных образцов плазмы крови оказались позитивными по PH и ELISA.

Экспериментальная инфекция
    Частично постулаты Коха были выполнены Origgi с соавторами в 2004 г. Черепахам орально или внутримышечно вводили по 150000 TCID50 суспензии культуры вируса. Через 4 недели черепахи были серопозитивны по PH и ELISA. С помощью ПЦР вирусную ДНК обнаружили во многих тканях, но в основном - в головном мозге. У 75% черепах развилось манифестное заболевание. При этом отмечали все характерные симптомы, за исключением ринита.

Диагностика
     Диагностику проводят, исходя из анамнеза и по клиническим симптомам. Предварительный диагноз ставят при обнаружении характерных эозинофильных включений в ядрах клеток эпителиального типа и нейтронов головного мозга. Диагноз уточняют с помощью НЭМ. Включения лучше видны в гистологических средах, окрашенных гематоксилин-эозином. В цитологических препаратах, окрашенных модификациями Романовского, включения встречаются реже и окрашиваются амфофильно. Используют соскобы со слизистой языка, окрашенные Diff-Quick. Изоляцию вируса проводят на культуре клеток сердца коробчатой черепахи (TH-1), а также инокулируя вирус в полость аллантоиса яиц черепах. ЦПД в культуре можно наблюдать в течение 4-5 дней. Значительно облегчает дифференциацию вируса иммунопероксидазный тест (Origgi, Jacobson, 1999). В Европе более распространена серологическая диагностика на основе реакции нейтрализации сыворотки (РН), разработанной Biermann (1995). Тест должен учитывать антигенный полиморфизм среди штаммов вируса. Например, сыворотка крови среднеазиатских черепах не нейтрализуется антигеном вируса I и II серотипа. Во время активной инфекции РН не эффективна. В некоторых случаях применяют метод парных сывороток. Удвоение титра в течение 60 дней свидетельствует об активной инфекции. Для получения данных с помощью РН требуется до 10-14 дней. Положительным считают титр не менее 8. Непрямая ELISA была разработана Origgi, Jacobson в 1999 г. на основании двух штаммов вируса, изолированных в США от гоферовой и балканской черепах.
Тест гораздо дешевле, специфичнее и чувствительнее РН, однако имеет те же ограничения: малоэффективен при низкотитровых реакциях антител и должен учитывать антигенные различия между штаммами вируса. Для обнаружения вирус-специфической ДНК используют 3 различных протокола ПЦР. Nested-PCR (по методу Van Devanter et al., 1996) оказалась наиболее универсальной и определяет вирусную ДНК всех 3-х серотипов вируса. Два других более специфичных протокола RT-PCR (по Origgi et al., 2000 и Teifke et al., 2000) в основном применимы для определения серотипа I. Для ПЦР лучше брать мазки из ротовой полости сухим стерильным тампоном. Для выявления ДНК в различных тканях обычно применяют гибридизацию in situ, особенно при экспериментальной инфекции (Teifke et al., 2000). 

Дифференциальная диагностика
Клинически THV нужно дифференцировать от иридовироза, заболевания, связанного с вирусом «Х», микоплазмоза, а также гиповитаминоза А, локального раздражения слизистых оболочек, химической интоксикации, сезонного ринита неясной этиологии, паразитарных болезней и т.п. При обнаружении вирусных включений их базофильная окраска свидетельствует скорее о наличии иридовируса.

Терапия
    Требуется строгая изоляция больных животных. Ацикловир назначают системно, внутрь через зонд. Суммарная суточная доза составляет 80 мг/кг; считается, что лучше разделять ее на 2-3 приема. Ноздри промывают противовирусными препаратами (Офтан Иду) или каплями ципромед, после чего проводят тщательный туалет ротовой полости и местно наносят крем с ацикловиром на все видимые очаги поражения. Для профилактики вторичной инфекции назначают курс инъекций энрофлоксацина (10 мг/кг каждые 48 часов) или цефтазидима (20 мг/кг каждые 72 часа). В качестве превентивной терапии отдельные авторы рекомендуют байпамун внутримышечно по 0,1-1 мл в зависимости от размеров черепахи 3-4-кратно с интервалами по 48 часов (McArthur et al., 2001). Обсуждалась и перспектива применения интерферонов и биофлавоноидов, но никаких данных о фармакокинетике этих препаратов у рептилий не опубликовано. Профилактически лучше назначать их в предзимовочный период. Этиотропная терапия ацикловиром более успешна при лечении первичной инфекции, в отличие от рецидивов заболевания.
Большое значение при THV имеет поддерживающая терапия, включающая введение полиионных растворов с глюкозой через зонд или интрацеломически (1-3% от м.т. в сутки), витаминов (катозал, беплекс) и питательных смесей. 
Карантин для вновь поступающих животных должен составлять от 6 недель до 6 месяцев. Для черепах из групп, перенесших вспышку заболевания, требуется изоляция не менее 12-18 месяцев. Необходима текущая и заключительная дезинфекция мощными вирулицидными дезинфектантами, такими как виркон или септабик.


АДЕНОВИРУСЫ

     Представители семейства Adenoviridae поражают наземных позвоночных, в основном, млекопитающих и птиц. Вирионы аденовирусов представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки изометрические частицы диаметром 70-90 нм. Они состоят из сердцевины, содержащей белок, и единую 2-спиральную молекулу ДНК и икосаэдрического капсида, построенного из 252 капсомеров, из которых 240 гексоны и 12 пептоны, расположенные на вершинах икосаэдра. В семействе выделяют 2 или 3 рода.

Характеристика возбудителя
     У рептилий аденовирусы обычно вызывают заболевание ЖКТ и связанных с ним пищеварительных желез, реже отмечают поражение респираторного тракта. Инфекция была отмечена у габонских гадюк B. gabonica, обыкновенного удава B. constrictor, королевского питона P. regius, удавчика E. colubrinus, нескольких видов полозов Elaphe spp. королевских змей Lampropeltis spp., капского варана V. exanthematicus, бородатых агам P. vitticeps, хамелеона Джексона Ch. jacksoni, гемитекониксов и молодых нильских крокодилов (Boyer et al., 2000). 
Заболевание имеет наибольшее ветеринарное значение среди бородатых агам в возрасте до 6 мес. (Crocker et al., 2005). В материале, полученном от больных животных, зачастую обнаруживают более мелкие икосаэдрические частицы, по-видимому, депендовирус, а также в некоторых случаях кокцидий Isospora spp.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
У ящериц прижизненно отмечают неспецифические симптомы: анорексию, гиподинамию, вздутие брюшной стенки, изменения стула. У хамелеона Джексона прижизненно отмечали респираторный синдром, и вирус был выделен в слизи трахеи и пищевода. Посмертные изменения выражаются в основном в поражении печени (гепатит с диффузным острым некрозом гепатоцитов, гидропической дегенерацией и липидозом), поджелудочной железы (острый панкреатит с поражением экзокринной части паренхимы и периостровковой инфильтрацией лейкоцитами), энтерите (с некрозом и баллонной дегенерацией энтероцитов, лимфоцитарной инфильтрацией l. propria) и почечном тубулярном липидозе. У змей отмечают рвоту, опистотонус, запрокидывание головы, вздутие брюшной стенки. Кал может представлять собой желтоватые мажущиеся пастообразные выделения. В некоторых случаях этот материал заполняет пилорический отдел желудка и тонкий кишечник. На секции выявляют гепатит с диффузным некрозом и образование макроскопических белых очагов в паренхиме, гастроэнтерит с гиперплазией слизистой оболочки, множественными петехиями вдоль складок, атрофией главных клеток желудка, баллонной дегенерацией, некрозом и слущиванием энтероцитов, инфильтрацией l. propria лимфоцитами и плазмацитами. В некоторых случаях изменения в желудке змей напоминали ранее описанный в литературе, но не верифицированный идиопатический гастрит (Garner et al., 2006). Крупные внутриядерные, как правило, базофильные включения наблюдают в эпителии тонкого кишечника, пилорического желудка и печени, реже – в слизистой пищевода, клетках миокарда и легких.

Антигенная вариабельность и родство
     Секвенированные ПЦР-амплификаты, выделенные от вирусов 3-х видов ящериц, позволили отнести вирус к роду Atadenovirus. По-видимому, существует определенная видоспецифичность среди штаммов аденовирусов, так как в некоторых случаях материал, содержащий вирус и полученный от змей, не удается изолировать в культуре клеток игуаны или гадюки (Juhasz, Ahne, 1992; Ogawa et al, 1992).

Экспериментальная инфекция
     Новорожденного обыкновенного удава заразили путем интрацеломической инокуляции суспензией культуры вируса, выделенной от капского варана. Удав пал с картиной острого некроза печени через 14 дней. Повторно вирус выделить не удалось (Jacobson et al., 1985).

Эпизоотические особенности
     На основании скудных литературных данных можно заключить, что при аденовирозе бородатых агам инкубационный период может составлять около 3-4 недель. Источником инфекции могут быть ящерицы в возрасте 1-6 месяцев. Взрослые агамы могут становиться латентными носителями. Источником заражения разных видов рептилий, возможно, являются королевские змеи Lampropeltis spp, их молодняк наиболее чувствителен к вирусу. Высокая восприимчивость характерна также для молодняка полозов и некоторых гремучников. Вероятно, в связи с потенциальной опасностью этого заболевания, при расширении диагностических возможностей в США болезнь включат в протокол обязательных исследований при перемещении рептилий (Crocker et al., 2005).

Диагностика
     Диагноз ставят при обнаружении характерных темно-фиолетовых ядерных включений в клетках печени и тонкого кишечника больных ящериц и змей. Уточняют диагноз с помощью НЭМ пораженных тканей и выделением вируса в культуре клеток (IgH-2, VH-1). Для обнаружения вирусной ДНК в тканях используют недавно разработанную nested-PCR на праймерах к гену вирусной ДНК-зависимой полимеразы, амплифицированному от вирусов млекопитающих, птиц и лягушек (Wellehan et al., 2003). Кроме того, применяют ДНК-гибридизацию in situ (Garner et al., 2006).

Дифференциальная диагностика
Дифференцируют с гепатитами и гастроэнтеритами иной этиологии.

Терапия
Не разработана. 

ИРИДОВИРУСЫ

Иридовирусы поражают насекомых, морских беспозвоночных, рыб, амфибий и рептилий. Это крупные вирусы, диаметр вирионов 175-220 нм. Капсид имеет икосаэдрическую форму и у некоторых видов покрыт липопротеиновой оболочкой. Геном представлен линейной 2-цепочечной ДНК. В семействе выделяют 4 рода.
Иридовирусы, выделенные от рептилий, можно отнести к 4 генетически изолированным группам (Marshang, Becher, 2004):
- эритроцитарные вирусы ящериц, змей и черепах (LEV);
- неохарактеризованные вирусы черепах и ящериц;
- инфекции, обусловленные родом Ranavirus у амфибий, рыб, черепах, ящериц и змей;
- инфекции, обусловленные родом Iridovirus у насекомоядных ящериц и сверчков.

Род Ranavirus

Характеристика возбудителя
     Впервые Ranavirus изолировали от рептилий в конце 90-х годов ХХ века. Этот вирус чаще встречают у сухопутных черепах, особенно у среднеазиатской черепахи A. horsfieldi, балканской черепахи T. hermanni (Marschang et al., 1999) и каролинской коробчатой черепахи T. carolina (Mao et al., 1997). Сравнительно недавно ранавирус выдели от зеленых питонов M. viridis в Австралии (Hyatt at al., 2002) и геккона в Германии (Marschang еt al., 2002), а также зарегистрировали эпизоотическую вспышку заболевания в группе из 5 звездчатых черепах G. platynota (Johnson, Norton et al., 2004). Ранавирусы широко распространены в природных популяциях амфибий. На бридинговых фермах в Южной Америке они вызывают массовую гибель головастиков. По всей видимости, даже хитридиомикоз пока не играет такой роли, как ранавироз, вызывающий гибель популяций лягушек по всему миру. В последнее время случаи гибели спонтанно зараженных амфибий отмечены и в Европе (Essabauer et al., 2004).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
     У заболевших амфибий заболевание проявляется неврологическими расстройствами, геморрагиями и отеком. У лягушек, также как и у рыб в прудовых хозяйствах, важную роль в патогенезе заболевания играет секундарная стрептококковая инфекция (обусловленная у рыб различными видами Streptococcus, Lactococcus, Vagococcus и Enterococcus). У черепах прижизненно отмечают респираторный синдром, конъюнктивит, отек в области шеи и стоматит, но без образования характерных для герпесвироза дифтерических бляшек, а также гепатит и энтерит. Гистологически выявляется системный васкулит с некротическими поражениями в селезенке, почках, эпикарде, печени и легких, а также слизистой различных отделов ЖКТ.

Антигенная вариабельность и родство
     Геном расшифрован в настоящее время у трех видов Ranavirus, поражающих амфибий: TFV (выделен в Китае от тигровой лягушки), ATV (вирус выделен от аксолотля) и RRV, последние два вида поражают бесхвостых амфибий в Северной Америке. В США от бесхвостых амфибий выделено еще три изолята: вирус FV-1, FV-2, FV-3. При вспышке иридовирусной инфекции у звездчатых черепах G. platynota отмечено наибольшее сходство у выделенного штамма с вирусом лягушек FV-3.

Экспериментальная инфекция
    Штаммом ранавируса, выделенным от звездчатой черепахи, заразили красноухих черепах путем оральной и внутримышечной инокуляции. У черепах, зараженных внутримышечно, клинические симптомы наблюдали спустя 1 мес. после заражения. После эвтаназии у экспериментальных животных наблюдали изменения, характерные для натуральной инфекции. ПЦР дала положительный результат  во всех основных тканях-мишенях. В группе черепах, зараженных орально, изменения были минимальны; ПЦР была позитивна только первые двое суток после заражения (Johnson et al., 2006). Натуральная инфекция у этого вида черепах до настоящего времени не зарегистрирована.

Эпизоотологические особенности
      Предполагается, что Ranavirus проник в природные популяции лягушек в Южную Америку вместе с маточным поголовьем лягушек-быков, разводимых на фермах (Mazzoni, 2004). Вероятно, заболевание среди сухопутных черепах вызвано натуральным или рекомбинантным вирусом лягушек. Во время вспышки заболевания среди звездчатых черепах в США, вирус, генетически идентичный штамму, выделенному от больных черепах, был изолирован от одной из лягушек, отловленной на территории фермы.

Диагностика
     Обнаружение базофильных включений в цитоплазме эпителия ротовой полости, клетках эндотелия и фиксированных макрофагах внутренних органов (легких, печени, почек, ЖКТ). При выделении вируса в культуре клеток (ТН-1) ЦПД наблюдали через 2 суток. Измененные ткани и культуру клеток исследуют с помощью ТЭМ. Для ПЦР используют специфические праймеры к гену основного белка капсида и вирус-специфической цитозин-метилтрансферазы (Essbauer et al., 2004).

Дифференциальная диагностика
     При заболевании лягушек дифференциация с любой генерализованной инфекцией, проявляющейся эритемой и кожными манифестациями. При заболевании черепах дифференцируют с герпесвирозом и микоплазмозом.

Терапия
Не разработана.

Род Iridovirus

Характеристика возбудителя
     Иридовирусы центрального рода паразитируют исключительно у насекомых. В свое время их собирались использовать в составе инсектицидов. У рептилий иридовирусная природа включений в эритроцитах ящериц и змей впервые была доказана еще в 1966 г. (Stehbens, Johnson, 1966). Однако изолировать вирус и определить его систематическую принадлежность смогли лишь в 2001 г., когда две независимые лаборатории в Германии провели секвенирование вирусной ДНК, кодирующей основной белок капсида (Just et al., 2001, Marschang et al., 2002). Вирус был выделен у 5 видов ящериц (все были разведены в неволе), а также в колонии сверчков Acheta domesticus. Исследованный 500-нуклеотидный фрагмент ДНК оказался идентичным во всех изолятах. Позже аналогичный штамм выдели у другого вида сверчков – G. bimaculatus. 

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
     У ящериц отмечают прогрессирующие поражения кожи и кахексию, либо внезапную смерть. У сверчков заболевание проявляется гиподинамией и опуханием брюшка. Павшие насекомые имеют характерную голубоватую иридисценцию хитина.

Антигенная вариабельность и родство
     Выделенные от рептилий и сверчков штаммы генетически идентичны, однако связь с эритроцитарным вирусом ящериц остается невыясненной. 

Экспериментальная инфекция
     Постулаты Коха были выполнены группой Marschang в 2005 г. (Marschang et al., 2005). Вирусом, выделенным в культуре клеток (VH-2, TH-1) от хамелеона Ch. hoenelii, заразили бородатых агам и сверчков. Вирусную ДНК обнаружили в тканях зараженных ящериц путем гибридизации in situ и ТЭМ. Сверчки, у которых проявилось манифестное заболевание, оказались чувствительнее к этому штамму, чем ящерицы. Вирионы с характерной морфологией выявили с помощью ТЭМ у всех погибших насекомых в цитоплазме клеток жирового тела, даже в тех случаях, когда ПЦР давала отрицательный результат. Вирус вновь был изолирован от больных ящериц и сверчков, как в культуре клеток рептилий (VH-2, TH-1), так и клеток насекомых (SF-21).

Диагностика
     Для обнаружения вируса в тканях животных используют недавно разработанную nested-PCR, ТЭМ и гибридизацию in situ, а также изоляцию в культуре клеток. Выявление вирусной ДНК от сверчков оказывается более проблематичным из-за сильного бактериального загрязнения (Weinmann et al., 2006).

Дифференциальная диагностика
     При заболеваниях ящериц, обусловленных вирусом насекомых, болезнь дифференцируют с другими кожными инфекциями. При поражении эритроцитов (LEV) включения дифференцируют с протозойными болезнями (плазмодииды или анаплазмы), гемолитическими изменениями (вакуоли, «альбуминоидные тельца»), герпесвирусом.

Терапия
Не разработана.

ПОКСВИРУСЫ

     Вирусы, относящиеся к семейству Poxviridae, поражают позвоночных и насекомых. Вирионы поксвирусов представляют собой овальные или прямоугольные частицы размером 220-450×140-260 нм, имеющие сложную структуру. Они состоят из центрального нуклеотида, овальных боковых тел и наружной оболочки. Нуклеотид содержит единую 2-спиральную линейную молекулу ДНК, связанную с белком, и окружен гладкой мембраной, Боковые тела, как бы сдавливая нуклеотид, придают ему на разрезе форму гантели. Наружная оболочка вириона состоит из липидов и трубчатых белковых структур. В подсемействе Chlordopoxvirinae, поражающем позвоночных, выделяют 8 родов.

Характеристика возбудителя
     Впервые вирус был обнаружен методом ТЭМ у трех разведенных в неволе очковых кайманов (Jacobson et al., 1979) с характерными очаговыми изменениями на коже. В дальнейшем похожие поражения наблюдали у нескольких видов черепах (Frye, 1981). До настоящего времени вирус не был выделен в культуре, и его генетический анализ и антигенные свойства остаются неизученными.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения
     У крокодилов наблюдают серовато-белые округлые пятна на поверхности тела и особенно на коже головы вокруг век, барабанной перепонки и интегумента верхней и нижней челюстей. У черепах наблюдают гиперкератоз и слущивание кожи, напоминающее клиническую картину при гипервитаминозе А. В биоптате кожи обнаруживают множественное эозинофильные внутрицитоплазматические включения в гипертрофированных эпителиальных клетках. Среди молодняка кайманов на крокодильих фермах могут отмечаться эпизоотические вспышки при скученном содержании животных
            
Антигенная вариабельность и родство
Не изучены.

Диагностика
   Предварительный диагноз ставят по клиническим симптомам и при обнаружении характерных вирус-индуцированных включений в цитоплазме кератиноцитов. Диагноз уточняют с помощью НЭМ.
   
Дифференциальная диагностика
   У крокодилов болезнь дифференцируют с нодулярным дерматитом при гиповитаминозе Е, дерматомикозами и поверхностными дерматитами бактериальной этиологии. У черепах заболевание дифференцируют с ятрогенным гипервитаминозом А.

Терапия
Не разработана. 

*** Сокращения, встречающиеся в тексте: ВЗН – вирус Западного Нила; ЖКТ – желудочно-кишечный тракт; ИФА – иммунофлуоресцентные 
антитела; НЭМ – негативная электронная микроскопия; ПЦР – полимеразная цепная реакция; РИФ – реакция иммунофлуоресценции; РН – реакция нейтрализации; РТГА – реакция торможения гемагглютинации; ТЭМ – трансмиссивная электронная микроскопия; ЦНС – центральная нервная система; ЦПД – цитопатогенное действие; ЭПР – эндоплазматический ретикулум; ELISA – твердофазный иммуноферментный анализ; RT-PCR – ПЦР в режиме реального времени.

Научные исследования в зоологических парках
Выпуск 22, 2007